Page 52 - 中國動物保健雜誌2018年第20卷第4期

科研
??

袋里的?性病毒尿囊液体??到 表3 ?性病料接种SPF?胚情?
10~15mL 即可停止??；用移液 ?性 第一代 第二代 第三代 收?尿囊
??透析袋里的?性病毒尿囊液吸 病料 接种 24h 存 72h 收 接种 24h 存 72h 收 接种 24h 存 72h 收 液 (mL)
（枚） 活 ? （枚） 活 ? （枚） 活 ?
入?菌瓶里，-20℃?存?用。 1 5 5 5 5 5 5 30 29 29 109
??的?性病毒尿囊液用 10% 2 5 5 5 5 5 5 30 28 28 103
福??林?活，100mL ?性病毒尿 3 5 4 4 5 5 5 30 29 29 108
囊液中加入 0.2mL 福??林??， 4 5 5 5 5 5 5 30 26 26 95
1h 后放入 -20℃?用。取?活后的
?性病毒尿囊液接种 9 日? SPF ?
胚，72h 后收尿囊液?行 RNA 提
取并?行 RT-PCR，方法如 1.8。
1.11 ???性??抗原效价?定
?考新城疫??技? GB/T
16550-2008 中 血 凝 ? ?（HA）
和血凝抑制??（HI）方法，使用
?准?性血清?????性??抗
原效价，并与新城疫?准??抗原
?行?比。

2 ?果与分析
2.1 疑似病料RNA的提取及RT-
? 1 疑似病例 RT-PCR ???果（M: DL-2,000 Marker；1 ～ 17: 疑似病料）
PCR??
16 份疑似病料中?? RNA 提
取和 RT-PCR 反?，取 PCR ?物
5μL+6×loading Buffer 2μL，加
?于 1% ?脂糖凝?中。?泳?件：
?? 100V，?? 20min。
??疑似新城疫病料共? 16 份
（?果如? 1），?出 4 份，?性
率? 25%。
2.2 SPF?胚培?
4 份?性病料，每份第一代接
种 5 枚，第二代接种 5 枚，第三代
接种 30 枚。接种情?（如表 3）：
2.3 ?性病料 PCR ??
?所得 4 份?性病料?行 RT- ? 2 ?性病料尿囊液 RT-PCR ?果 (M: DL- ? 3 ?活?性??抗原RT-PCR?果（M: DL-
PCR ??，均??性（如? 2）。 2000 Marker；1 ～ 4: ?性病料尿囊液 ) 2000 Marker；1 ～ 4: ?活?性??抗原）
2.4 病毒效价??与凝集价??
表4 血凝??（HA）和血凝抑制??（HI）?果
?性病料尿囊液通?血凝??
8
7
7
8
（HA）分??到 2 、2 、2 、2 ， ?? HA HI
1 2 10 10log2
符合?期。 2 2 10 10log2
?性病料尿囊液所制?的 4 ? 3 2 10 10log2
血凝?位抗原与?准?性抗体?行 4 2 10 10log2
血凝抑制??（HI），效价?果分 ?准?性抗原 2 9 10log2

38 中??物保健 | 2018.04