Page 100 - 中國動物保健雜誌2017年第19卷第11期

??研究

-20 等。 ?生气泡。
??各?????室采用商品化 ELISA ?? 4.4 孵育

盒?行家畜疫病??，主要生?厂家有?州??研 一般分室?孵育 （18～25℃）和?箱孵育 （37
究所、??金?、美? IDEXX、西班牙海博?、北京 ℃）?种，?箱孵育要特?注意封板的密?性，防止
天之泰、青?立?等，不同??盒的??方法、?色 溶液蒸?。ELISA 板与板?量不?放，避免受?不
系?和??波?不一致，挑???盒?必?注意其 均。
方法与???准要求、?器???光片是否匹配 4.5 洗?
（?表 2）。 洗?是?了清除非特异性干扰物?，加入洗?
液的量一般 300μＬ 左右，以
表 2 常用商品化 ELISA ??盒
?孔但不溢出?宜。每次洗?
???目 生?厂家 ??盒方法 ?色系? ??波?
均?甩板和拍板，拍板?重以
?州??所 液相阻?ELISA HRP-TMB OD450
口蹄疫抗体 ?液体回流和?气泡?准。拍
??金? 固相阻?ELISA HRP-TMB OD450
北京天之泰 LSI PRRS?接ELISA HRP-TMB OD450 板后??快加液，避免因放置
??耳病抗体
美?IDEXX PRRS X3?接ELISA HRP-TMB A650 ?????致孔??合物失去
西班牙海博? ??ELISA HRP-ABTS OD405
?瘟抗体 生物活性。
??金? 阻?ELISA HRP-TMB OD450
4.6 加入???合物
美?IDEXX gB-阻?ELISA HRP-TMB A650
?狂犬抗体
美?IDEXX gE-阻?ELISA HRP-TMB A650 按??盒?明稀?或直接
青?立? 阻?ELISA HRP-TMB OD450 加入??抗体（?色或?色）。
小反??疫抗体
?州??所 ??ELISA HRP-TMB OD450
4.7 ?色和??
4 操作步?和影?因素 ?色?，需避光，否? TMB 、ABTS 等?色液易
4.1 ?品前?理 失效。注意?色液有一定致癌性，酸性?止液有腐
抗体??需采集?物血液分离血清，溶血的? ?性。?色后，?在?定????止反?并及?在
品因??胞?放?氧化物?活性物?和血?蛋白 ???上用?定波???。????? OD 值受?
而影????果。?本?存?????形成多聚体 ?波?、孔?气泡、孔壁液体、孔底液体斜度影?。
?而?生本底?深?象和假?性的出?。 5 免疫抗体???果判定
4.2 ??回? ELISA ???果常以?性 （+）、?性 （－）、可疑
??室?度?控制在 18～25℃，?冰箱中取出 （±）表示。根据 2017 年?家?物疫病??与流行
ELISA ??盒并打?，使??恢复至室?，直至洗? 病??查?划，免疫效果?估?，口蹄疫疫苗免疫
液?晶完全溶解。?步?可?少 ELISA 板孔与孔之 后（? 28d，其他畜 21d 后）液相阻? ELISA ??抗

?的差异。 体效价?26 ?免疫合格。高致病性??耳病活疫苗
4.3 稀?和加? 免疫 28d 后 ELISA ??抗体?性判定?免疫合格。
某些??盒（如??金??瘟抗体 ELISA ?? ? 瘟 疫 苗 免 疫 21d 后 抗 体 阻 ? ELISA 或 ? 接
盒）需要??品或?照?行稀?，有的??盒（如? ELISA ???性判定?免疫合格。小反??疫活疫
州所口蹄疫液相阻???盒） 提供的?性血清已 苗免疫 1～3 ?月??? ELISA 或阻? ELISA ??
?行?一定倍?稀?，有的不需稀??性?照（如 ?果??性即判定免疫合格。
IDEXX PRRS X3 ??盒），有的??盒 （如海博? 6 存在??及分析
?瘟?? ELISA ??盒） 不需要?品稀?直接加 6.1 ??性?照不成立
入 ELISA 板孔。??耳病抗体 ELISA ??盒常常 原因可能有??盒批次??定性差或不在有
需要??品?行 40 倍或 200 倍的稀?， 取?量? 效期之?、??性血清的保存????或?融次?
小，必?准确取?。加???加至孔的底部，避免 ?多、操作?程中不同批次??混用等，可以通?