Page 99 - 中國動物保健雜誌2017年第19卷第11期

??研究

1 ELISA 技??介 合包被的抗原（??抗体??一?抗原）。
1.1 技?原理 2 家畜疫病 ELISA ??方法
已知抗原与待?抗体 （或已知抗体与待?抗 口蹄疫 （O 型、 I 型和 A 型）、??耳病、?瘟、?

原）的?合反?在固相支持物上?行，反??果的判 ?狂犬、小反??疫抗体??均有???易指定或
?以?与底物作用后的?色反???准，?色?度与 替代方法 和 ? 家 ? 准 ， ? ? ? 准 分 ? ? GB/T
?本中待?物?度成正比或反比?系。?色后的有色 18935—2003 口蹄疫??技?、GB/T18090—2008
?物?????取 OD 值??算和判定?果。 ?繁殖与呼吸?合??方法、GB/T16551—2008 ?
1.2 技?特? 瘟??技?、 GB/T18641—2002 ?狂犬病??技?、
1.2.1 免疫活性 抗原与抗体?合形成抗原抗体复 GB/T 27982—2011 小反??疫??技?。此外，?
合物的?程是一种??平衡，反?式： Ag（抗原） +Ab 有行??准如 NY/T678—2003 ??狂犬病免疫?
（抗体） →Ag·Ab（复合物）。抗原或抗体在体外?合 ??方法，或??部公布的上述病种防治技??范
到某种固相?体表面后或解离后，仍然能保持其免 中的??方法如?瘟防治技??范?瘟抗体阻?
疫?活性。 ELISA ??法。
1.2.2 特异性 抗原抗体的?合?生在抗原的?定 ELISA ??板包被的抗原或抗体不同成分，?

簇与抗体的?合位?之?，化??构和空?构型互 定了不同用途。口蹄疫?构蛋白 VP 用于血清型和
??系，具有高度的特异性。 免疫抗体??，非?构蛋白 NSP 用于通用型和感染
1.2.3 敏感性 ?具有很高的催化效率，可放大抗 抗体??；??耳病核衣?蛋白 （N 蛋白）不能??
原抗体反?效果，?而使?定方法?到很高的敏感 ?生病毒中和抗体，不适合用于?疫苗免疫效果?
性，一般可以?到 μg/mL-ng/mL ?。 ?，而是?重于 PPRSV 感染后的早期??；??耳
1.3 基本?型 以??抗体?例，分?三种?型。 病膜基?蛋白 M、糖蛋白 GP5 用于??感染或免疫
??接 ELISA：利用???的抗抗体 （二抗）??已 抗体；?瘟主要包被整?病毒或 E2 蛋白用于感染
与固相抗原?合的待?抗体。 ???心 ELISA：用特 与免疫抗体??；常用??狂犬病疫苗缺失 gE 基
异性抗原?行包被和制???合物，以??相?的 因，因此 gE 蛋白用于感染性抗体??， gB 蛋白用于
抗体。与?接法不同，??心法以??特异性抗原 免疫抗体??；小反??疫包被 B 抗原或 N 蛋白，
代替??抗抗体。??? ELISA：用已知抗原包被? 用于感染与免疫抗体??（?表 1）。
?板，然后同?加入已知的抗体和待?抗体??? 3 ??商品化 ELISA ??盒

表1 家畜疫病ELISA??方法

病种 ELISA方法 ???准 ???准 包被物 用途
?构蛋白VP 血清型、免疫抗体
口蹄疫 液相阻?ELISA ???易指定方法 GB/T 18935-2003
非?构蛋白 通用型、感染抗体
N 感染抗体
??耳病 ?接ELISA ???易替代方法 GB/T 18090-2008
M、GP5 感染或免疫抗体
?瘟 ?抗ELISA ???易指定方法 GB/T 16551-2008 病毒或E2 感染与免疫抗体
gE(gpI) 感染抗体
??狂犬 阻?ELISA ???易指定方法 GB/T 18641-2002
gB 免疫抗体
B抗原 感染与免疫抗体
小反??疫 ??ELISA ???易替代方法 GB/T 27982-2011
N蛋白 感染与免疫抗体
一般商品化的 ELISA ??盒?成主要有 96 孔 tion）、?性?照 （positive control）、?性?照 （negative

平底包被板 （coated plate）、?品稀?液 （dilution control）。有的??盒如?州??研究所口蹄疫病毒
buffer）、洗?液 （washing buffer）、???的?合物 液相阻? ELISA ??盒?有病毒抗原，青?立?小
（conjugate）、?色底物 （substrate）、?止液 （stop solu- 反??疫病毒阻? ELISA 抗体????盒有吐?

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