Page 82 - 中國動物保健雜誌第19卷第1期
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??研究
因此?方法多用于?本的快速??或?查。 接玻璃定量管与空气?力泵,???力,使溶液以
2.3 高效液相色?和液相色? - ???用法 1.8 mL/min 的流速通?免疫?和柱,至一部分空气
液相色? - ???用法(Liquid chromatography 通?柱体。以 5 mL 水?免疫?和柱?行 1 次清洗,
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tandem mass spectrometry ,LC-MS/MS) 是目前定量 ?全部流出液;使 5 mL 空气通?免疫?和柱。向柱
??的主要方法。其优?是集液相色?的高分离度 中加入 1 mL 甲醇?行洗?,流速? 0.8 mL/min,在
和????的通用性、可以提供分子?构信息、? 玻璃?管中收集洗?液,在 45℃?件下用氮吹? 50
敏度高、??性好,?同???多种霉菌毒素提供 ℃?行吹干。用 0.5 mL 流?相??渣?行溶解,?
了新的方向。 旋混?,? 0.45um ?膜,供液相色??定。
2.4 ?体金法 ?体金快速定量法前?理?程 :准确?量 10.00
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免疫?体金技? (Immune Colloidal Gold Tech- g ??于 200 mL 具塞?形瓶中,加入 50.0 mL 水,密
nique)是以?体金作?示???物?用于?品中待 ?,用?旋振?器振? 1~2 min,?置后用???
分析物??的一种免疫??技?,可用于?品中待 ?,?取 1.0~1.5 mL 混合液于离心管中,用离心机
??物?的快速定性或定量??,是一种?定、? (4 000r/min) 离心 1 min。取?液或离心后上清液
敏的??方法。 100 uL 于另一离心管中,加入 1.0 mL 稀???液
3 ?体金定量??法的优? (??盒自?),充分混?待?。
目前,我???的??方法都是采用免疫?和 3.2 高效液相色?法与?体金定量??法的??步
柱和?化柱和高?液相色?的方法?霉菌毒素? ??比
行??,具有高?敏度,?果准确等优?。但是?? 高效液相色?法??步?
方法作?霉菌毒素??的?准方法,需要大型? 1)?定液相色??定?件 (全英文操作界面):
?,需要??相?的免疫?和柱,前?理?程复?, ?色?柱: C 18 柱,柱? 150 mm,?? 4.6 mm,填料直
需要配需??人?,??成本高,?程复?,且?? ? 5 um 或相?者;?流?相:量取 100 mL 乙?至
?程中需要接触高毒性的?准品,不适合常年做大 1 000 mL 的容量瓶中,加入水定容至 1 000 mL。混
量??的?督??。 合均?并通? 0.45 um ?膜;?流速:0.8 mL/min;?
近年?,??上推出了霉菌毒素定量???,配 ??波?: 218 nm;???量: 20 uL;?柱?:室?。
合?用的???,可以在十几分??完成霉菌毒素 2)色??定:分?取??溶液和?准工作液各
的快速定量??,其???果与???器方法具有 20 ul(或相同体?)注入高效液相色???行?定,
?高的吻合度。不?能?准确地提供所???品被 以?准工作液?度??坐?,以峰面??分值??
霉菌毒素污染的程度,也??品今后的?置提供了 坐?,?制?准工作曲?,以保留??定性,用?准
?据基?,在??上得到了?泛的?用 。 工作曲?????行定量。
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3.1 高效液相色?法与?体金定量??法的前?理 ?体金定量?????步?:
?比 1)??体金????冷藏??(2℃~8℃)取
以?吐毒素?例,高效液相色?法前?理?程 : 出放置至室?。?孵育器??至 45 ℃。????平
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1)提取:?取粉碎??? 50 g(精确到 0.1 g)置 放在孵育器凹槽中,打?加?孔。
于 250 mL 具塞?形瓶中,加入 10 g 聚乙二醇及 2)准确移取 300 uL 待?溶液,加入???加
200 mL 水,高速均? 2 min,或振?器振? 60 min。 ?孔中,??加?孔及孵育器?。
?置,通?快速定性????,利用玻璃???? 3)孵育 5min 后,取出????察 C ?(?控
?行 1~2 次??,使?液澄清, ?即通?免疫?和 ?) T ?(???)?色情?。若出?: ?C ?不出?;
柱?行?化。 ?C ?出?,但?散或?重不均?; ?C ?出?,但
2)?化:把免疫?和柱与 10 mL 玻璃定量管? T1 或 T2 ??散或?重不均?等情????效??。
行?接。向玻璃定量管中加入 1 mL 澄清提取液,? 4)?????的?吐毒素???道,?始?品