Page 92 - 中國動物保健雜誌第19卷第1期

??研究

1×10 -13 稀?的模板与?性?照的?增曲?基本一 ?副?嗜血杆菌的??依据，而不能作????病
致，?明 1×10 -13 稀?的模板?增后的?光?度? 的依据，在?床??中，除了?察?群?床症?、病

有?到?值， 因此，?光 PCR ??盒?敏度? 1× 理?化，?需借助分子生物?技??行确?。
10 -12 稀?的模板，而常? PCR 的?泳?果?示 1× 本研究利用?光 PCR ??盒和常? PCR ??
-10
10 -11 稀?度就看不出??，其?敏度? 1×10 ，充 盒?行??，?果?示，副?嗜血杆菌与金?色葡萄
分?明了前者?敏性占??的优?，是常? PCR 的 球菌、沙?氏菌、大?杆菌均?交叉反?，?明??
100 倍。（?表 2，? 4-6） 种??盒的特异性均? 100%。就?敏性而言，?光
2.3 ?床?品?? PCR 的? 1×10 -12 稀?度，而常? PCR ? 1×10 -10
??床疑似病例?菌采集 20 份血?，利用常? 稀?度，?明?光 PCR 的?敏度是常? PCR 的 100
PCR 和?光 PCR 分??行??， ?果?示（?表 3） 倍，优于常? PCR，且??速度快，?果判?不需要
常? PCR ??方法的?性率? 60%（12/20），?光 借助?泳分析，大大?省了??并降低了溴化乙?
PCR ??方法的?性率? 75%（15/20）。 等核酸染料?人体的致癌危?和?境的污染，是一
3 ?? 种安全、快速的??方法，?于?床上副?嗜血杆菌

???模化??的?展，副?嗜血杆菌病成? 病的确?及?病?合防控等具有重要意?。■
近年?危害??的?重?菌病之一，?病率及危害
程度呈逐年上升的??， 引起?大?殖?和??工 ?考文?
[1]
作者的重? 。如何快速、准确地???病是控制? [1] 于江,?家?,?玉玉,等.副?嗜血杆菌?光定量 PCR ??技?
病的??。?菌分离?定?然是?菌病??的“金 的建立与?用[J].家畜生???,2010,31（4）:77-81.
[2] ??正,王振全,薄清如,等.TaqMan 探??光 PCR ??副?嗜
?准”，但是由于副?嗜血杆菌的??要求??苛
血杆菌方法的建立和?用 [J]. 江?????,2011,27（6）:
[2]
刻，??分离培? ，因此?方法通常不作?主要的
1367-1370.
????方法，血清???只能作??群是否感染
表2 ??、常?PCR与?光PCR方法???敏度的比? 表3?床?品???果表
??PCR???果 常?PCR???果 ?光PCR???果 ?光PCR ?光PCR
?品稀?度 ?品? 常?PCR?果 ?品? 常?PCR?果
1次 2次 3次 1次 2次 3次 1次 2次 3次 Ct值 Ct值 ?果 Ct值 ?果
1×10 -6 + + + + + + + + + 20.194 1 + 22.285 + 11 + 20.862 +
1×10 -7 + + + + + + + + + 22.248 2 - 29.261 + 12 + 22.195 +
1×10 -8 + + + + + + + + + 23.92 3 - 30.134 - 13 + 27.159 +
1×10 -9 + + + + + + + + + 24.746 4 + 21.143 + 14 - 29.182 -
1×10 -10 + + + + + + + + + 26.777 5 - 29.152 - 15 - 30.184 -
1×10 -11 - - - - - - - - - 27.753 6 - 31.214 - 16 + 23.816 +
1×10 -12 - - - - - - - - 28.725 7 + 20.472 + 17 - 31.294 +
1×10 -13 - - - - - - - - - 36.127 8 + 23.182 + 18 - 29.176 +
1×10 -14 - - - - - - - - - U 9 + 25.115 + 19 + 24.179 +
1×10 -15 - - - - - - - - U 10 + 24.013 + 20 + 26.135 +

? 4 ?? PCR ?敏度?果 ? 5 常? PCR ?敏度?果 ? 6 ?光 PCR ??盒?敏度曲?
M：Marker D2000；1： ? 性 ? 照；2：? 性 ? 照 ；3：10-15；4：10-14；5：10-13；6：10-12；7：10-11；8： 注 1：10-6;2：10-7;3：10-8;4：10-9;5：
10-10；9：10-9；10：10-8；11：10-7；12：10-6。 10-10;6：10-11;7：10-12.