Page 32 - 中國動物保健雜誌2018年第20卷第01期

疾病
防治

doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2018.01.006

?瘟病毒感染的??与病毒分离?定

李小?
( 山?省博??畜牧??局 山??州 256500)

? 瘟（Duck plague，DP） 俗 1.3 ??室 PCR ?? 2 ?果与分析
?“大?瘟”，又名?病毒性?炎 1.3.1 病料?品的?理 ?菌采集病? 2.1 ?病??床症?
（Duck viral enteritis，DVE），是 的病???，研磨后反复?融 3 次， 病?初期表?精神沉郁，食欲
由?瘟病毒（Duck plague virus， 离心取上清液即得?理后的病料?品。 不振，之后排??色稀便，眼?水
DPV）引起的一种急性、?血性及 1.3.2 引物??与合成 根据?考文 ?，?部?大，?翅下垂，?腿麻痹，
[1]
高度致死性的?染病 。本病的特征 ? [4] 合成 1 ??瘟特异性??引 不愿走?，?病 3 ～ 5d 死亡。
是体?升高，病???流?，下痢， 物（ 上 游 引 物 P1：5’-CGAC 2.2 ?病?病理剖?
食道黏膜出血或坏死，?腿麻痹， TACA TCCA TACC CACT- 剖?可??肝表面以及切面有
排出?色稀?，剖?特征可?心? 3’； 下 游 引 物 P2：5’- TATG 大小不等的灰白色坏死?及小出血
表面有?尖大小的出血?，肝?? CTTC AGCT ACAC TA-3’，引 ?，喉?及气管黏膜充血，咽喉部
大明?，呈土?色，?脆，肝?表 物由生工生物工程（上海）股份有 及气管有黏液性分泌物，腺胃、肌胃、
面有?尖大灰色坏死灶和出血?， 限公司合成。 脾?和??呈出血性坏死，肺?出
?囊?大，脾?大，肺充血、出血 1.3.3 PCR ?增 取?理后的病料? 血水?，??部皮下????浸?。
和坏死，咽喉部有黏液、气管?有 品 0.2mL，利用病毒基因?提取? 2.3 病料 PCR ??
[2]
少量?液性分泌物 。本病流行?泛， ?盒提取 DNA 后?行 PCR ?增， PCR ?增?物?? 1% ?脂糖
?病一旦?生，?播迅速，?病率和 PCR ? 增 程 序 ?：95 ℃ 5min； 凝??泳，在位于 510bp ?可?特
死亡率高，能?造成非常大的??? 95℃ 30s，47℃ 30s，72℃ 45s， 异性 DNA ?增??，与?期大小 [4]
失，是危害???的最主要疫病之一 35 ?循?；72℃ 10min。PCR ? 相符。
[3] 。加??瘟病毒????防和控制 增?物??脂糖凝??泳??。 2.4 病毒增殖
本病都具有重要的??意?，本文通 1.4 病毒分离与?定 ?胚接种后96 ～120h 死亡，
???殖??生的一例?瘟病毒感染 1.4.1 病毒的增殖 取?理后的病料 ?胚全身有??出血和水?，?胚
的?治，以期??大?殖?提供?考， ?品 2.0mL ? 0.45μm ?器??除 尿囊膜增厚，出?白色痘斑。
??整??治?程介?如下。 菌后，?毛尿囊膜途?接种 10 日? 2.5 核酸序列?定
?胚 10 枚，120h 后收集含痘斑的 ?序?果??Blast序列比?，
1 材料和方法 ?胚尿囊膜和?胚尿囊液，??胚 表明插入到 pMD18-T ?体的基因
1.1 主要??与??盒 尿囊膜剪碎并用尿囊液制成?液， 片段的核?酸序列??瘟病毒的特
pMD18-T 克隆?体?自?生 12000r/min 离 心 15min， 取 上 清 异性序列，通?分子生物?手段?
物（大?）有限公司；病毒基因? 液，-20℃保存。 一步?明????生了?瘟病毒感
提取??盒、?回收??盒和?粒 1.4.2 分离毒株 PCR ?定 取保存 染，??病??的疾病防控提供有
提取??盒?自北京百泰克生物科 的病毒液 0.2mL，按照 1.3.3 的方 力的技?保障。
技有限公司。 法?行 PCR ?增与??。
1.2 ?床?? 1.4.3 核酸序列?定 PCR ?增?物 3 ??
1.2.1 ?床症? ?察?病?的?床 ??回收??盒回收?化，?接至 ?瘟是一种?染性?、死亡率
症?。 pMD18-T 克隆?体，?粒提取? 高的疾病，?伏期一般? 3 ～ 7d，
1.2.2 病理?化 ?病死?解剖，? ?盒提取重??粒，送生工生物工 感染?表?出精神不振，??部?
察病理?化。 程（上海）股份有限公司?序。 成?起的??，病?喜???，并

18 中??物保健 | 2018.01