Page 73 - 中國動物保健雜誌2017年第19卷第11期
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疾病防治
表1 7种病毒RT-PCR/PCR?增信息??表
引物序列 ?增大小 RT-PCR/PCR RT-PCR/PCR
病毒
（5'-3'） （bp ） ?增体系 ?增程序
F ： GCTTCCCAGCGTAGTTGA
PEDV 450
R ： GAAGTGGCCCTGGATTTG 2×Buffer 12.5μL 、 one step
F：GGCGACTACTGATACGAA enzyme Mix 0.5μL，上、下 50 ℃ 50min ， 94 ℃ 5min ， 94 ℃ 45s 、
RV 241 52 ℃ 45s、72 ℃ 45s，30 ?循?；72 ℃
R ：GGCTCGCATCATCCTCTCA 游引物各0.5μL ，RNA 5μL ，
10min 。
F：TGGAGTTGTCTGGGTTGC H O 6μL 。
2
TGEV 609
R ：AAGTGGTATTTGTGTGTGA
F ： GTTTACCACTCCCTG 2×Buffer 12.5μL、one step
PRRSV 350 50 ℃ 50min ，94 ℃ 5min ，94 ℃ 45s、
R ： TTGGGRTGACCGTGA enzyme Mix 0.5μL ，上、下
56 ℃ 45s 、 72 ℃ 45s ， 30 ?循?； 72 ℃
F ： TGTATCTCAGAGGGG 游引物各0.5μL ，RNA 5μL ，
CSFV 230 H O 6μL 。 10min 。
R ： TCGGTATT T TTGTCA 2
F：ATGGGCATCGGCGACTAC
PRV 270 2×Premix Taq 12.5μL 、上、
R ：GCGAGAAGAGCTGCGAGT 94 ℃ 5min ，94 ℃ 30s、55 ℃ 30s、72
下游引物各 0.5μL ， DNA 5μ
F：GTTATGGTATGGCGGGAG ℃ 30s ， 30 ?循?； 72 ℃ 10min 。
PCV-2 189 L ， H O 6.5μL 。
2
R ：CCGCTCTGTGCCCTTTGA
列，?疫病混合感染的确?提供了有效的??技?
手段。本病例通? PCR 方法确?致病原? PEDV、
PRRSV、PCV-2 混合感染，??病??找到了致病
原，也?其它病例的??提供了?考与借?，?床
中??病毒性腹??，?重?考?是否存在混合感
染，做到及?、准确的确?致病原。■
?考文?：
[1] 霍翠梅,郝晴晴,?玉星.2015 年 -2016 年?宁地??致?腹?
的病毒性病原?查?告[J].?代畜牧,2016(5):38.
[2] 于新友,李天芝,沈志?.一步法多重 RT-PCR ???流行性腹
?病毒、??染性胃?炎病毒和? A 群??病毒方法的建立
和?用[J].??,2016(2):105-107.
[3] 李圣,??莉,李?炳,等.一步法 RT-PCR 同??? CSFV 和
PRRSV 方法的建立及?用[J].?物???展,2011,32(6):40-44.
? 1 RT-PCR/PCR ?增?果 [4] 郭?秋,曲哲?,??.??狂犬病病毒和???病毒 2 型多重
注 ： M. DL 2 000 DNA Marker；1.PEDV、RV、TGEV 一 步 法 三 重 PCR ??方法的建立与初步?用 [J]. 中????志,2015,51
RT-PCR ?增?果； 2.PRRSV、CSFV 一步法?重 RT-PCR ?增?果； 3. (10):34-37.
PRV、PCV-2 ?重 PCR ?增?果。
?性感染率依次? 75.0%、0、13.6%、40.9%、36.4%
和 77.3%，PEDV 与 CSFV、PRRSV、PCV-2 混合感染
率分?? 45.6%、31.8%、59.1%，表明 PEDV 成?目
前仔?病毒性腹?的主要致病原，且与 CSFV、
PRRSV、PCV-2 的混合感染率增高，混合感染情?
??重。多种致病原的混合感染?疫病的??与防
治增加了?度， PCR 方法因其操作??、??快速、
敏感性高，且能??增致病原的特异性核?酸序
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