Page 72 - 中國動物保健雜誌2017年第19卷第11期

疾病防治

doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2017.11.028

一例仔?病毒性腹?的 PCR ??

李小?
（山?省博??畜牧??局 山??州 256500）

[3]
?病毒性腹?是?群各种腹?中造成危害最 法三重 RT-PCR ??方法，李圣等 建立的 PRRSV、
[4]
??重的一种急性、高度接触性?道?染病，可? CSFV 一步法?重 RT-PCR ??方法，郭?秋等 建
致仔?高死亡率以及耐??生??慢、?料?酬降 立的 PRV、PCV-2 ?重 PCR ?? 方 法分? 合成
[1]
低、?殖成本增加等 ，是危害仔?健康的主要?染 PEDV、RV、TGEV、PRRSV、CSFV、PRV、PCV-2 特 异
病之一。2017 年 4 月，山?博?某???生腹?疫 性??引物 （引物信息如表 1 所示）。分?利用
情，主要表?? 7 日?仔?突然?病，体?升高，食 PEDV、RV、TGEV 一步法三重 RT-PCR ??方法，

欲?退，咳嗽，?吐，?重腹?，?水，全身淋巴?? PRRSV、CSFV 一步法?重 RT-PCR ??方法?病
大，?壁?薄，呈透明?，?道中???色稀?及未 料?品的 RNA ?行??，利用 PRV、PCV-2 ?重
消化凝乳?。通??床特征初步判??仔?病毒性 PCR ??方法?病料?品的 DNA ?行??。各种
腹?，??一步确定致病原，采集病死?病料?品 RT-PCR/PCR ?增体系与?增程序如表 1 所示。
并?行了?流行性腹?病毒 （PEDV）、???病毒 1.5 ?增?果的??
（RV）、??染性胃?炎病毒 （TGEV）、?繁殖与呼吸 RT-PCR/PCR ?增?束后，取 10μL ?增?物
障 ? ? 合 征 病 毒 （PRRSV）、 ? ? ? 病 毒 2 型 ? 1%?脂糖凝??泳?行??，根据?泳中特异
（PCV-2）、?瘟病毒 （CSFV）和?狂犬病毒 （PRV）7 性?增片段的大小判定???果。
种可?致仔?腹?的致病原的??室 PCR ??。 2 ?果与分析
1 材料和方法 如 ? 1 所 示 ，PEDV、RV、TGEV 一 步 法 三 重
1.1 主要??与??盒 RT-PCR ??方法?病料?品?增出 1 ?? 450bp
DL 2,000 DNA Marker、One Step RT-PCR Kit、 特异性??，与?期 PEDV ?增片段的大小相符；
Premix Taq 均?自?生物（大?）工程有限公司；病 PRRSV、CSFV 一步法?重 RT-PCR ??方法?病
毒基因? RNA 提取??盒、 病毒基因? DNA 提取 料?品?增出 1 ?? 350bp 特异性??，与?期

??盒均?自北京百泰克生物科技有限公司。 PRRSV ?增片段的大小相符；PRV、PCV-2 ? 重
1.2 病料?品的采集与?理 PCR ??方法?病料?品?增出 1 ? 189bp 的特
?菌采集病死?的?道??，?其加入 5 倍体 异性??，与?期 PCV-2 ?增片段的大小相符。?
??菌生理?水中，???碎机?碎后，? “-20℃ ?果表明此次仔??生的腹?疫情主要由 PEDV、
～室?”反复?融三次后， 12,000rpm 离心 10min， 吸 PRRSV、PCV-2 的混合感染所致。
取上清液即??理后的?床病料?品。 3 ??
1.3 病毒基因?的提取 近年?，??我????的?模化快速?展，
按照病毒基因? RNA 提取??盒的操作步? 仔?病毒性腹?的?病率明?增加，尤其是 2010
提取?床病料?品的 RNA，按照病毒基因? DNA 年以?我????南到北，??到西??暴?
[1]
提取??盒的操作步?提取?床病料?品的 DNA。 PEDV ?异毒株感染疫情，霍翠梅等 ??宁地?
1.4 RT-PCR/PCR ?? 21 ??模化?? 58 份腹?仔??品?行 PEDV、

根据于新友等 建立的 PEDV、RV、TGEV 一步 TGEV、RV、CSFV、PCV-2、PRRSV 和 PRV 的??，
[2]