Page 108 - 中國動物保健雜誌2017年第19卷第6期
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??研究


                  弓形虫 (Toxoplasma gondii)是一种世界范??               研室提供,同法?理?用。
              分布的?胞?寄生虫,能感染几乎所有的?血?                             1.3 方法

              物,包括人?、家畜和野生?物。人畜和禽?等其他                               ?物犬、?血 DNA 的提取按酚 - 氯仿苯酚抽
              ?物?中?宿主,?及?科??物是它的?末宿                             提法?行,弓形虫 RH 株滋?体的 DNA 提取常?采
              主。人?通?消?未煮熟的肉? (含有??囊?或                           用酚 - 氯仿法?行。以?物犬、?血? DNA ?模
              孢子化卵囊)而感染,可以?致胎儿和免疫低下的                            板,?行?管一步法巢式 PCR,?增弓形虫 529 多
              人群患病,甚至威?他?的生命。狗和?是世界上                            拷?片段。弓形虫 529 外引物 F:5'-CGC TGC AGG
              最受?迎的?物?物,如今,狗已?承?了?多功                            GAG GAA GAC GAA AGTTG-3',R:5'-CGC TGC A-
              能:作盲人向?,作?警?和?狗,有一??物的好                           GA CAC AGT GCA TCT GGA TT-3',弓形虫 529 ?
              ?是不可??的,?和狗都成了人?家庭的一部                             引物 F:5'-AGA AGG GAC AGA AGT CGA AG 一 3',
              分。但?物和人弓形虫感染都呈上升??,因此,准                           R:5' 一 CTC CAC TCT TCA ATT CTC TCC 一 3'。PCR
              确把握?物弓形虫感染??,?弓形虫病的防治尤                            反??件?: 95 ℃ 2 min,95 ℃ 30 s,68 ℃ 30 s,72

              ?重要。                                              ℃ 50 s ?行 15 循??增;然后在 95 ℃ 30 s,58 ℃
                  目前弓形虫的常用??方法主要有血清?、病                          30 S,72 ℃ 50 s,72 ℃ 5 min ?件下再?行共 35 循
              原形??定和小鼠腹腔接种及核酸??等。血清?                            ??增,每??本 DNA ?增反?均在一? PCR 反
              ???性率?高,但常存在假?性及既往感染的缺                            ?管??行。取 15 μL PCR ?增?物?行?脂糖凝
              ?;小鼠接种??周期??,?床上?以推?; PCR                         ??泳。以 RH 株弓形虫滋?体 DNA 作?性?照,
              ??待??品中虫体核酸的方法是近年?常用的?                            ddH2O 作空白?照。PCR 反??果??一。
              ?手段,以??到病原体目的 DNA ??性?准,此
              法可以快速、敏感、特异地??到弓形虫感染。?了
              解河南省新?市?物犬、?弓形虫感染情?,本研究
              于 2014 年 10 月 -2015 年 10 月?用 PCR ??技?
              ?展了?物犬、?弓形虫感染的流行病??查。
              1 材料与方法
              1.1 ??
                  蛋白? K(USA Genview),Tris ?和酚(北京鼎

              ?昌盛生物技 ?有限?任 公司),PCR 2*Es Taq                                ? 1 弓形虫 529 多拷?片段的?增
              master mix (中?北京康?世?生物科技有限公                       A:健康犬; B:健康?; C:ddH20;+:弓形虫 RH 株; M:DNA Marker
                                                                1.4 ?据?理
              司),弓形虫 RH 株由新???院人体寄生虫?教研
                                                                    EXCEL 2010 建立?据?, SPSS 19.0 ?行??
              室?期保种,引物由上海生工生物工程技?服?有
                                                                分析。不同种??性率之?的比?用 x2 ??, P<0.
              限公司合成。其他??均???分析?。
                                                                05 ?差异有???意?。
              1.2 ?品采集及??理
                                                                2 ?果
                  2014 年 10 月 -2015 年 10 月在新?市各地?
                                                                2.1 犬、?弓形虫感染情?
              ?机采集?物犬 124 份血?,每只?物采集 3~4 mL
                                                                    犬弓形虫?性率? 10.48%,?弓形虫?性率?
              ??血, 4 ℃存放??。?机收集?物?血? 54 份,
                                                                51.85%,????分析, X2=36.313,P<0.005,新?市
              其中雌性 19 份,雄性 23 份, 12 份性?不明;体重
                                                                ?物?与?物犬感染率有?著差异。(?表 1)
              1.5~7.5 kg;年?小于 6 ?月 9 份, 6~12 ?月 8 份,
                                                                2.2 各年?段?弓形虫感染情?
              1~3 ? 5 份,3 ?以上 2 份, 20 份年?不?。每只采
                                                                    小于 6 月??感染率? 66.67%,6 月 ~12 月?
              取 1.5~2 mL ??血 EDTA 抗凝,4 ℃存放??;健
                                                                ? 感 染 率 ? 75.00% ,1 ? ~3 ? ? 感 染 率 ?
              康犬、 ?血 400 μL,由新???院人体寄生虫?教
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