Page 108 - 中國動物保健雜誌2017年第19卷第6期

??研究

弓形虫 （Toxoplasma gondii）是一种世界范?? 研室提供，同法?理?用。
分布的?胞?寄生虫，能感染几乎所有的?血? 1.3 方法

物，包括人?、家畜和野生?物。人畜和禽?等其他 ?物犬、?血 DNA 的提取按酚 - 氯仿苯酚抽
?物?中?宿主，?及?科??物是它的?末宿 提法?行，弓形虫 RH 株滋?体的 DNA 提取常?采
主。人?通?消?未煮熟的肉? （含有??囊?或 用酚 - 氯仿法?行。以?物犬、?血? DNA ?模
孢子化卵囊）而感染，可以?致胎儿和免疫低下的 板，?行?管一步法巢式 PCR，?增弓形虫 529 多
人群患病，甚至威?他?的生命。狗和?是世界上 拷?片段。弓形虫 529 外引物 F：5'-CGC TGC AGG
最受?迎的?物?物，如今，狗已?承?了?多功 GAG GAA GAC GAA AGTTG-3'，R：5'-CGC TGC A-
能：作盲人向?，作?警?和?狗，有一??物的好 GA CAC AGT GCA TCT GGA TT-3'，弓形虫 529 ?
?是不可??的，?和狗都成了人?家庭的一部 引物 F：5'-AGA AGG GAC AGA AGT CGA AG 一 3',
分。但?物和人弓形虫感染都呈上升??，因此，准 R：5' 一 CTC CAC TCT TCA ATT CTC TCC 一 3'。PCR
确把握?物弓形虫感染??，?弓形虫病的防治尤 反??件?： 95 ℃ 2 min，95 ℃ 30 s，68 ℃ 30 s，72

?重要。 ℃ 50 s ?行 15 循??增；然后在 95 ℃ 30 s，58 ℃
目前弓形虫的常用??方法主要有血清?、病 30 S，72 ℃ 50 s，72 ℃ 5 min ?件下再?行共 35 循
原形??定和小鼠腹腔接种及核酸??等。血清? ??增，每??本 DNA ?增反?均在一? PCR 反
???性率?高，但常存在假?性及既往感染的缺 ?管??行。取 15 μL PCR ?增?物?行?脂糖凝
?；小鼠接种??周期??，?床上?以推?； PCR ??泳。以 RH 株弓形虫滋?体 DNA 作?性?照，
??待??品中虫体核酸的方法是近年?常用的? ddH2O 作空白?照。PCR 反??果??一。
?手段，以??到病原体目的 DNA ??性?准，此
法可以快速、敏感、特异地??到弓形虫感染。?了
解河南省新?市?物犬、?弓形虫感染情?，本研究
于 2014 年 10 月 -2015 年 10 月?用 PCR ??技?
?展了?物犬、?弓形虫感染的流行病??查。
1 材料与方法
1.1 ??
蛋白? K（USA Genview），Tris ?和酚（北京鼎

?昌盛生物技 ?有限?任 公司），PCR 2*Es Taq ? 1 弓形虫 529 多拷?片段的?增
master mix （中?北京康?世?生物科技有限公 A：健康犬； B：健康?； C：ddH20；+：弓形虫 RH 株； M：DNA Marker
1.4 ?据?理
司），弓形虫 RH 株由新???院人体寄生虫?教研
EXCEL 2010 建立?据?， SPSS 19.0 ?行??
室?期保种，引物由上海生工生物工程技?服?有
分析。不同种??性率之?的比?用 x2 ??， P<0.
限公司合成。其他??均???分析?。
05 ?差异有???意?。
1.2 ?品采集及??理
2 ?果
2014 年 10 月 -2015 年 10 月在新?市各地?
2.1 犬、?弓形虫感染情?
?机采集?物犬 124 份血?，每只?物采集 3~4 mL
犬弓形虫?性率? 10.48%，?弓形虫?性率?
??血， 4 ℃存放??。?机收集?物?血? 54 份，
51.85%，????分析， X2=36.313，P<0.005，新?市
其中雌性 19 份，雄性 23 份， 12 份性?不明；体重
?物?与?物犬感染率有?著差异。（?表 1）
1.5~7.5 kg；年?小于 6 ?月 9 份， 6~12 ?月 8 份，
2.2 各年?段?弓形虫感染情?
1~3 ? 5 份，3 ?以上 2 份， 20 份年?不?。每只采
小于 6 月??感染率? 66.67%，6 月 ~12 月?
取 1.5~2 mL ??血 EDTA 抗凝，4 ℃存放??；健
? 感 染 率 ? 75.00% ，1 ? ~3 ? ? 感 染 率 ?
康犬、 ?血 400 μL，由新???院人体寄生虫?教