Page 23 - 中國動物保健雜誌2017年第19卷第2期
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???注


              ?果??：脾?胞增殖反??弱，但血清抗体（尤其                           ??菌在不同?段分布并不均?，以胃、???菌
              是 rAD-S498-368 ?）?高。2012 年，焦茂?等分?                 量?高，但已?定植在胃?黏膜不同部位菌量不?
              构建了含有 PEDV sM、M 和 S 基因的重?腺病毒， 3                   ??延??生?化。同年，汪淼等?构建可以表?

              种腺病毒共感染 Vero ?胞后，取表?上清液以肌注                        与 PEDV COE 基因位置相同的 ps420（1 495～l 914）
              或口服免疫小鼠，再以 Western blotting 法?定免疫                 bp 基因重?乳酸乳球菌，??重?菌以?隔 14 d
              小鼠血清后???种免疫方式均可??抗体?生，                            ?? 3 次、每次?? 3 d 灌服家兔，再用中和???
              即 PEDV 的 sM、M 和 S 基因能在靶?胞?表?并保                    ?家兔血清中和 IgG，???重?菌???高水平
              持其免疫原性。2013 年，武存霞?考 NCBI ?据?                      的 体 液 免 疫 ? 答 。 2013 年 ， 訾 玉 ? 以 PEDV
              中公布的 PEDV JS-2004-2 株 S 蛋白基因序列, 构                 CH-GZH 株（江西?州）S 基因?靶基因，构建重?乳
              建 了 能 ? 表 ? S1 基 因 片 段 的 重 ? ? 痘 病 毒              酸菌 pMG36n/COE1NZ9000、pMG36n/COE2NZ9000、
              rSPV-Sl，分?在 1、14、28 d 用?疫苗注射免疫 ICR                pMG36n/COE3NZ9000, ? SDS-PAGE 凝??泳??
              小鼠，以病毒中和??在免疫小鼠体???到抗                             ??，重?菌均可表?相?抗原。同年，?德等构建
              PEDV 抗体。                                          可表? PEDV S 基因保?性抗原片段 C-COE 基因
              2.3 ?菌?体疫苗                                        的重?乳酸菌，???表?的重?乳酸菌按?? 3

              2.3.1 乳酸菌疫苗 2008 年，葛俊?用 8 ?构建的表                   次、?隔 1 周口服或皮下注射免疫 SPF ?雌性
              ? PEDV 免疫保?性抗原蛋白的重?乳杆菌以每 2                        Balb/c 小鼠，? ELISA 方法??小鼠血清抗体及
              周 1 次、每次持? 3 d、?? 3 次口服的方法免疫小                     IFN-γ 含量，?果??重?菌??了体液免疫和?
              鼠， 用 ELISA 方法??小鼠新??便、血液、眼?洗                      胞免疫：血清抗体和 IFN-γ 水平?高，且口服?指
              物、鼻腔?洗液、外生殖道?洗液等?品中的 slgA                         ?均高于注射? （P＜0.05）。2014 年，徐波等构建了
              和血清中的 IgG 水平，??免疫后均?生了高水平                         TGEV、PEDV 融合 S 基因重??粒 pUCm-T-TPs，
              的抗体，通?淋巴?胞增殖??和?胞因子?定?                            在此基?上构建了重?乳酸乳球菌 L.lactis NZ9000/
              ?疫苗同???了明?的?胞免疫，且??构建的                            pRNA48-TPs，使融合基因 TPs 得以表?， 并?乳酸
              ?胞表面表?型疫苗比分泌表?型疫苗能??更                             乳球菌?胞?蛋白?行了提取，其后，分?用口服
              好的免疫?答，??疫苗均能刺激小鼠高水平的黏                            重?菌液和注射重?蛋白的方法免疫日本大耳白
              膜免疫和?胞免疫?答。同年，董?娜自疑似 PED                          兔，口服?按 2 次 / 周、?? 4 周灌胃??表? TPs
              病??病料中?增到?度? 50lbp 的 PEDV COE 基                   基因的重?菌菌液方法?行，注射?按 1 次 / 周、 ?
              因，其序列与 PEDV CV777 株同源性? 99.4%，在此                  ? 3 周肌肉注射弗氏完全佐?或不完全佐?加重

              基?上构建了可表? COE 基因的重?乳酸乳球菌                          ?表?蛋白方法?行，?免疫兔血清用 Western-blot
              pNZ8149-COENZ3900，用 Westernblot 和?接免疫             方法?行??，?果??口服?、注射?兔体?均
              ?光方法????：重?菌中的目的蛋白定位在菌                            ?生了 TPs 蛋白抗体。
              体表面，具有反?原性。 2009 年，胡桂?等?董?娜                       2.3.2 ?毒沙?氏菌疫苗 2011 年，徐??自腹??
              等制?的重?乳酸菌??培?，再分?用菌液以?                            ?便中?增到 PEDV COE 基因和 SD 基因，构建了
              隔 2 周、?? 3 次口服的方法? 7 周?仔?和妊娠                      重?沙?氏菌 C501-COE、C501-SD，目的蛋白可以
              80 d 的母??行免疫，用?接 ELISA 法?免疫后                      在重?菌中分泌表?，分??重?菌以口服或注射
              15～20 d 的仔?血清 IgG 和?黏膜 SIgA、母?生?                  的方式免疫 BalB/c 小鼠， 并在 2 周后?部分免疫小
              后初乳中 SIgA ?行?定，?果??相?抗体水平明                        鼠?行了?化免疫，通??血清 IgG、?道黏膜
              ?升高。 2011 年，董浩等?构建的 PEDV-COE-GFP                  sIgA、脾?胞分泌的 IFN-γ 水平????：小鼠体
              NZ3900 重?乳酸乳球菌?口服途?接种 6～8 周                       ??生了体液免疫和?胞免疫。2012 年，廖?丹用

              ?、体重? 20 g 雄性 BALB／c 小鼠，以免疫?光法                    四川分离株 PEDV(SC-L 株)和 TGEV（SC-H 株） 作
              ?察黏膜涂片?菌在胃?黏膜的定植情?，?果?                            ?种毒，构建了?? PEDV S1 基因、 TGEV S 基因、


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