Page 69 - 中國動物保健雜誌2018年第20卷第3期
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2.2 貉犬瘟?病毒序列分析
根据优化的反?体系和?件所
得，PCR ?增体系? 20μL：Mix
10μL，ddH 2 O 7μL，上游引物 0.5μL
（20pmol/μL），下游引物 0.5μL
（20pmol/μL），cDNA 2μL。反??件：
??性 95℃ 5min；?性 95℃ 30s，
退火 53℃ 30s，延伸 72℃ 2min，35
?循?；再延伸 72℃ 10min。
1% ?脂糖粉凝??泳??，
切?回收并送?序公司?序。 ? 1 4 ?引物 RT-RCR ?增?物
使用 SeqMan 和 BioEdit ?件 注：M ? DL2000 DNA Marker，1-4 分?? 4 ?特异性引物?增所得??，5 ??性?照。
? 4 ?序列拼接，并保存? fast 格
式，?? ClustalW ?其?行多重
序列比?，?算貉源犬瘟?与其他 HM063009（1989 年哈?克斯坦 94(7):215-222.
宿主 CDV 的同源百分比。 水貂）以及 HM046486（2007 年 [2] Kameo Y, Nagao Y, Nishio Y, et al.
?比??果?入 MEGA 6.0 ? 哈?克斯坦海豹）?于同一分支上。 Epizootic canine distemper virus infection
件，采用 P-distance 方法和 N-J among wild mammals.[J]. Veterinary
模型构建?化?，?置 Bootstrap 4 ?? Microbiology, 2011, 154(3-4):222-229.
值? 1000。 ?物感染CDV后致死率极高， [3] Yoshikawa Y, Ochikubo F, Matsubara
[5]
甚至可? 100% ，同? CDV 全球 Y, et al. Natural infection with canine
3 ?果分析 均有分布，可感染多种?物，?特 distemper virus in a Japanese monkey
3.1 RT-PCR ???果 定宿主屏障 [6,7] ，研究中貉犬瘟?病 (Macaca fusca ta).[J]. Veterinary
? 增 的 CDV-L 基 因 的 4 ? 毒与艾鼬、水貂、海豹等宿主体? Microbiology, 1989, 20(3):193.
片段?度分?? 990bp、900bp、 ??的 CDV 的核酸及氨基酸的同 [4] 金?? , ?巧? , ?明 , 等 . 大熊?源犬瘟
850bp 和 1025bp，同???增片 源性?高，并?于系??育?的同 ?病毒基因???特征分析 [J]. 中???科?
段相同，如? 1 所示。 一分支。 ,2015,48(7):1445-1452.
3.2 CDV-L 基因序列?果分析 本 次 ?? 的 4 段 基 因只 是 [5] Wyllie SE, Kelman M, Ward MP.Wyllie
CDV-L 基因与 41 种有代表性 CDV 全基因?中 L 基因的部分片 SE, Kelman M, Ward MP.Epidemiology
的犬瘟?病毒病 L 基因核?酸同源 段，并不能完全反映整?病毒毒株 and clinical presentation of canine
性在 92.33%~98.95%，氨基酸同 的特异性，因此在后?的研究中? distemper disease in dogs and ferrets
源性在 80.93%~98.28%，与登? ????增其它片段，拼接完成后 in Australia, 2006-2014 [J].Australian
?? KM926612（1992 年??于 再?行分析，??可以更好反映 veterinary journal, 2016, 94(7), pp.215-22.
中?艾鼬的基因序列）的毒株同源 ?患病貉 CDV 的特异性及?异程 [6] Lempp C, Spitzbarth I, Puff C, et al.
性最高，? 98.95%，与登??? 度。■ New Aspects of the Pathogenesis of
KM280689（2012 年 ? ? 于 ? 拉 Canine Distemper Leukoencephalitis[J].
圭狼的基因序列）的毒株同源性最 ?考文? Viruses, 2014, 6(7):2571-601.
低，? 92.39%。 [1] Wyllie S E, Kelman M, Ward M P. [7] Martinezgutierrez M, Ruizsaenz J.
所构建的系??育?如? 2 所 Epidemiology and clinical presentation Diversity of susceptible hosts in canine
示，可知?增得到的毒株与登?? of canine distemper disease in dogs distemper virus infection: a systematic
? KM926612（1992 年中?艾鼬）、 and ferrets in Australia, 2006-2014[J]. review and data synthesis[J]. Bmc
EU726268（2008 年中?水貂）、 Australian Veterinary Journal, 2016, Veterinary Research, 2016, 12(1):1-11.
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